?活動(dòng)介紹
 
2024年6月18日，博興生物邀請(qǐng)安捷倫細(xì)胞分析事業(yè)部在深圳灣實(shí)驗(yàn)室平臺(tái)部舉辦了2024年深圳第一場(chǎng)Seahorse XF 專場(chǎng)培訓(xùn)會(huì)活動(dòng)，這也是在深圳辦的第二場(chǎng)Seahorse XF 專場(chǎng)培訓(xùn)，此次活動(dòng)是基于對(duì)深圳區(qū)域用戶進(jìn)行售后回訪收集反饋信息以及綜合當(dāng)前Seahorse XF的使用情況而展開(kāi)的，此次活動(dòng)旨在給客戶提供一個(gè)線下面對(duì)面溝通交流的機(jī)會(huì)，幫助客戶更加全面深入的了解Seahorse XF細(xì)胞能量代謝的技術(shù)原理以及其應(yīng)用領(lǐng)域。
 
活動(dòng)現(xiàn)場(chǎng)
 
此次培訓(xùn)會(huì)安捷倫細(xì)胞分析應(yīng)用專家林鶴鳴分享了Seahorse XF 技術(shù)的原理、應(yīng)用介紹、數(shù)據(jù)分析處理及數(shù)據(jù)歸一化的理論部分,最后在儀器前進(jìn)行了實(shí)際操作演示。
安捷倫 Seahorse XF 技術(shù)可實(shí)時(shí)進(jìn)行功能性活細(xì)胞代謝分析，更直接地測(cè)量以及更深入地了解細(xì)胞過(guò)程。Seahorse XF 技術(shù)通過(guò)測(cè)量細(xì)胞代謝驅(qū)動(dòng)因素的關(guān)鍵指標(biāo)簡(jiǎn)化數(shù)據(jù)解析，并提供試劑盒和檢測(cè)等一站式解決方案，簡(jiǎn)化工作流程。進(jìn)一步了解研究人員如何在疾病建模、表型分析、靶標(biāo)鑒定與驗(yàn)證、作用機(jī)制以及先導(dǎo)化合物發(fā)現(xiàn)中利用細(xì)胞代謝能量分析。

 

 

?合影?

 

此次培訓(xùn)會(huì)吸引了約30名來(lái)自多個(gè)單位的用戶老師參加，按照慣例，我們?cè)跁?huì)后進(jìn)行了合影留念，此次培訓(xùn)會(huì)至此就告一段落了，但我們的服務(wù)遠(yuǎn)沒(méi)有結(jié)束，有疑問(wèn)歡迎咨詢博興生物技術(shù)支持。感謝安捷倫應(yīng)用專家親臨現(xiàn)場(chǎng)為大家?guī)?lái)如此專業(yè)的技術(shù)培訓(xùn)。感謝深圳灣實(shí)驗(yàn)室平臺(tái)提供培訓(xùn)場(chǎng)地。感謝各位老師撥冗前來(lái)參會(huì)學(xué)習(xí)。我們下期再會(huì)!!!
 
關(guān)于Seahorse數(shù)據(jù)歸一化
 
問(wèn);
為什么需要數(shù)據(jù)歸一化
答：
功能生物數(shù)據(jù)的歸一化是原始數(shù)據(jù)展示和后續(xù)分析工作流程中的關(guān)鍵因素，以確保對(duì)結(jié)果的準(zhǔn)確一致的解析。
Seahorse XF 代謝分析在這方面也是如此，實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行某種形式的歸一化。無(wú)論是比較不同的細(xì)胞類型、基因修飾還是化合物處理，都必須根據(jù)共同的參數(shù)將數(shù)據(jù)歸一化以便正確比較。Seahorse XF 可在包括細(xì)胞數(shù)、基因組 DNA 和總細(xì)胞蛋白質(zhì)的多個(gè)參數(shù)層面進(jìn)行歸一化。本文主要介紹使用細(xì)胞數(shù)（或細(xì)胞數(shù)的替代參數(shù)）來(lái)歸一化 XF 速率數(shù)據(jù)（OCR、ECAR、PER）的方法。
01貼壁細(xì)胞數(shù)據(jù)歸一化方法
通過(guò) Cytation 采集的圖像中的熒光標(biāo)記細(xì)胞核來(lái)測(cè)量每孔細(xì)胞數(shù)，此方法集成了XF 技術(shù)與 Cytation 細(xì)胞成像分析儀。
XF 成像和歸一化系統(tǒng)的典型工作流程如下：

具體請(qǐng)參考5994-0022ZHCN_Normalization App Note.pdf.(agilent.com.cn)
 

 

如圖 1A 所示，OCR 和 ECAR 隨接種密度成比例增加。完成 XF 分析后，通過(guò) XF 成像和細(xì)胞計(jì)數(shù)軟件采集熒光圖像并計(jì)數(shù)，如圖 1B 所示。圖 1C 顯示了歸一化后的數(shù)據(jù)，其中將代謝速率除以軟件計(jì)數(shù)得到的細(xì)胞數(shù)。在應(yīng)用細(xì)胞計(jì)數(shù)歸一化因子后，OCR 和 ECAR 動(dòng)力學(xué)曲線都發(fā)生重疊，特別是細(xì)胞加寡霉素和 FCCP 之前的基礎(chǔ)速率。因此，數(shù)據(jù)歸一化可以鑒定與細(xì)胞密度差異相關(guān)的真實(shí)生物學(xué)變化。如圖 1C 所示，F(xiàn)CCP 對(duì) OCR 的影響隨細(xì)胞密度而變化，而寡霉素導(dǎo)致的 ECAR 升高不受細(xì)胞密度影響。
02 T 細(xì)胞等懸浮細(xì)胞的歸一化方法
懸浮細(xì)胞由于細(xì)胞核尺寸小，且造血來(lái)源的細(xì)胞不能有效地吸收Hoechst熒光染料，在使用進(jìn)行熒光成像背景對(duì)比度較差，會(huì)影響計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性。而無(wú)標(biāo)記細(xì)胞成像計(jì)數(shù)技術(shù)，只有在亞匯合細(xì)胞密度下計(jì)數(shù)才可靠，而 Seahorse XF 方案通常建議需要接近完全的匯合下進(jìn)行檢測(cè)分析，因此通過(guò)熒光成像或無(wú)標(biāo)記成像方式進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)的方法均不太適合。采用單細(xì)胞統(tǒng)計(jì)計(jì)數(shù)原理的流式細(xì)胞儀，來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)懸浮細(xì)胞的計(jì)數(shù)就成為首選方法。因此，我們建議采用安捷倫的NovoCyte流式細(xì)胞儀進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)，以達(dá)到 Seahorse XF 分析平臺(tái)進(jìn)行數(shù)據(jù)歸一化的要求。
 
Seahorse XF與NovoCyte流式細(xì)胞儀進(jìn)行數(shù)據(jù)歸一化的典型工作流程如下:

 

安捷倫 NovoCyte 流式細(xì)胞儀提供了一種簡(jiǎn)單的解決方案，無(wú)需對(duì)流體系統(tǒng)進(jìn)行復(fù)雜的校準(zhǔn)或使用參比微球，并且樣品之間的殘留最少。NovoCyte使用小樣品體積，提供總細(xì)胞和活細(xì)胞的準(zhǔn)確細(xì)胞計(jì)數(shù)。該方法允許在接種前調(diào)整細(xì)胞密度，以防初始懸浮密度超出推薦范圍。該工作流程還對(duì)最終懸浮液計(jì)數(shù)，該活細(xì)胞計(jì)數(shù)用于歸一化接種板。
 

歸一化設(shè)備推薦

 Cytation 系列成像儀

Cytation 系列細(xì)胞成像儀可提供放大倍數(shù)高達(dá) 60 倍的熒光和高對(duì)比度明場(chǎng)成像。XY 導(dǎo)軌、聚焦、曝光、圖像采集和 LED 強(qiáng)度均為全自動(dòng)設(shè)置，簡(jiǎn)便易用。BioTek 功能強(qiáng)大的 Gen5 軟件可以無(wú)縫采集用于定量發(fā)布的數(shù)據(jù)，無(wú)需進(jìn)行大量培訓(xùn)。溫度控制在 45 °C，振蕩采用標(biāo)準(zhǔn)模式，可選 CO₂/O₂ 控制和注射器。Cytation 獨(dú)特的專利設(shè)計(jì)提供了定量的表型細(xì)胞圖像信息和出色的定量數(shù)據(jù)。